Perawatan dan penggunaan metode tabung ultrafiltrasi

Perawatan dan penggunaan metode tabung ultrafiltrasi

Fungsi tabung ultrafiltrasi:

1) Konsentrasi; 2) penghilangan garam; 3) Ganti penyangga; 4) Ini memiliki efek pemurnian parsial.

1. Tabung ultrafiltrasi baru dapat digunakan secara langsung tanpa perawatan lain;

2. Tabung ultrafiltrasi tidak dapat disterilkan pada suhu tinggi;

3. Perawatan tabung ultrafiltrasi saat mengganti protein pekat

Tabung ultrafiltrasi dapat digunakan kembali. Rendam dalam 0.1M NaOH selama 1-2 jam, cuci dengan air, lalu cuci dengan larutan yang relevan (air steril atau PBS) pada centrifuge selama 3 kali, yang dapat digunakan untuk memekatkan protein baru;

4. Perawatan tabung ultrafiltrasi yang ditempatkan secara normal

Untuk tabung ultrafiltrasi yang sering digunakan, rendam dalam 0.1M NaOH selama 1-2 jam, cuci dengan air dan rendam dalam air steril. Pastikan untuk menjaga membran filter tetap basah dan mencegah bakteri tumbuh;

5. Perawatan tabung ultrafiltrasi ditempatkan untuk waktu yang lama

Jika tabung ultrafiltrasi tidak digunakan dalam waktu lama, rendam dalam 01M NaOH selama 1-2 jam, cuci dengan air, dan rendam dalam etanol 20 persen untuk penyimpanan. Pastikan untuk menjaga membran filter tetap basah dan mencegah bakteri tumbuh;

6. Kecepatan sentrifugal yang digunakan untuk tabung ultrafiltrasi

Kecepatan sentrifugal umumnya 4000rpm (3000g umumnya direkomendasikan, dan maksimum tidak dapat melebihi 4000g). Setelah sentrifugasi selama 5-8 menit, sampel 4ml dapat dipekatkan hingga kurang dari 1ml hingga puluhan mikroliter; Jika kecepatannya terlalu tinggi, protein target akan jatuh, mengakibatkan hilangnya protein target; Kecepatan rendah, memakan waktu dan efisiensi kerja yang rendah;

7. Tindakan pencegahan saat kepala pistol memanjang ke dalam tabung ultrafiltrasi

Saat menambahkan larutan protein atau buffer ke tabung ultrafiltrasi, kepala pistol biru dapat digunakan; Namun, ketika protein target terkonsentrasi diserap dari bagian bawah tabung ultrafiltrasi, kepala pistol kuning harus digunakan; Ketika kepala pistol dimasukkan ke dalam tabung ultrafiltrasi, itu harus dicegah agar tidak menyentuh membran filter untuk menghindari menusuk membran filter;

8. Kurangi kehilangan adsorpsi protein dari tabung ultrafiltrasi

Membran tabung ultrafiltrasi dapat menyerap protein, yang akan mengurangi protein target sekitar 30 persen; Untuk mengurangi kehilangan protein, setelah menyerap larutan protein target, bersihkan bagian bawah tabung ultrafiltrasi dengan buffer protein untuk mencuci sebagian besar protein yang diserap oleh membran filter dan mengurangi hilangnya protein target; Jika protein murni terkonsentrasi, perhatikan bahwa volume terkonsentrasi tidak boleh terlalu kecil; Umumnya, tidak peduli seberapa disentrifugasi, sekitar 200 L larutan protein akan tertahan di bagian bawah;

9. Bagaimana mendefinisikan kegagalan tabung ultrafiltrasi

Dalam penggunaan normal, ketika membran filter tidak ditusuk, larutan protein pekat tidak mengandung protein atau jumlahnya sangat rendah (termasuk protein target), sedangkan larutan yang disaring pertama mengandung protein target, ini menunjukkan bahwa membran filter tidak valid dan perlu diganti dengan tabung ultrafiltrasi baru.