Proses Yang Efisien Dan Berbiaya Rendah Untuk Klarifikasi Dan Ultrafiltrasi Ragi Yang Mengekspresikan Protein Rekombinan
Ekspresi gen eksogen ragi tidak hanya dapat menghasilkan protein dan peptida rekombinan, antibodi dan vaksin, sitokin, faktor pertumbuhan, hormon dan zat bioaktif lainnya, tetapi juga dapat digunakan untuk menghasilkan enzim industri, makanan fungsional dan bahan biologis, yang memiliki prospek penerapan yang luas. .
Sistem ekspresi ragi mencakup dua sistem ekspresi yang umum digunakan, yaitu sistem ekspresi Saccharomyces cerevisiae dan sistem ekspresi ragi metanotrofik. Sistem ekspresi ragi metanol adalah sistem ekspresi ragi yang paling banyak digunakan saat ini, dan Pichia adalah yang paling umum digunakan, yang dapat menggunakan metanol sebagai karbon dan energi. Selain itu ada ragi Hansen, Sphaeroides dan lain sebagainya.
Apa pun jenis sistem ekspresi ragi, proses pemisahan dan pemurnian hilirnya serupa, dan aliran proses spesifiknya mengambil ekspresi ragi dari protein rekombinan dan obat polipeptida sebagai contoh.
Kaset membran mikrofiltrasi pemandu mengadopsi saluran aliran terbuka dan mode filtrasi aliran tangensial, yang secara efektif dapat memproses cairan umpan kompleks seperti cairan fermentasi ragi dan cairan perengkahan E. coli dengan kecepatan tinggi, dan dapat memastikan amplifikasi linier dari pengujian kecil hingga skala produksi. Desain modular yang ringkas, sambungan pipa yang sederhana, kemandirian dan keterbacaan sistem dapat melindungi operator dan mencegah polusi biologis. Dan tidak ada verifikasi pemeliharaan dan pembersihan. Oleh karena itu, sangat cocok untuk langkah klarifikasi pengolahan hilir awal.
Tujuan utama dari proses UF/DF adalah untuk menghilangkan kotoran dan menggantikan buffer. Kaset membran ultrafiltrasi pemandu memiliki homogenitas ukuran pori membran yang baik dan hidrofilisitas yang kuat, yang dapat memberikan fluks membran lebih tinggi dan adsorpsi protein lebih rendah, serta desain saluran aliran yang dioptimalkan, dengan penurunan tekanan lebih kecil, transfer material mudah, dan mempersingkat waktu filtrasi secara signifikan. Terlebih lagi, rangkaian produknya lengkap dan fleksibel untuk memenuhi kebutuhan berbagai aplikasi dengan skala berbeda. Oleh karena itu, sangat cocok untuk langkah pemrosesan hilir UF/DF.
Berikut ini adalah kasus penerapan membran Guidlingkasetdalam ekspresi ragi protein rekombinan.
Klarifikasi mikrofiltrasi
Kami menggunakan kaset membran pori berukuran {{0}}.11 meter persegi 0,22μm untuk mengklarifikasi 1,5L cairan fermentasi ragi (berat molekul protein target 42-55 KD) dengan mikrofiltrasi. Dalam keseluruhan proses mikrofiltrasi, laju pemulihan protein target, perubahan kekeruhan dan penipisan fluks membran diselidiki.
0-17menit adalah proses konsentrasi, 17-32menit adalah proses pencucian dan penyaringan. Selama keseluruhan proses mikrofiltrasi, TMP meningkat secara bertahap, kecepatan masuk cairan tetap tidak berubah, dan fluks material rata-rata adalah 45LMH.
Kekeruhan cairan adalah 600NTU sebelum mikrofiltrasi dan 8NTU setelah mikrofiltrasi, dan kekeruhannya jelas berubah.
Hasil penelitian menunjukkan rendemen protein target > 90%. Teknologi Panduan Kaset membran 0,22μm stabil dan cocok untuk skenario aplikasi ini.
Konsentrasi ultrafiltrasi
Konsentrasi ultrafiltrasi cairan klarifikasi 1,5L (berat molekul protein target 42-55kd) dilakukan dengan menggunakan kaset membran 10kd berukuran 0,11 meter persegi. Dalam keseluruhan proses ultrafiltrasi, laju pemulihan protein target, penipisan fluks membran, dan laju pemulihan fluks air diselidiki.
Sebelum dan sesudah digunakan, tingkat pemulihan membran bisa mencapai 90%.
0-15menit adalah proses konsentrasi, 15-18menit adalah proses pertukaran cairan. Selama seluruh proses ultrafiltrasi, TMP meningkat secara bertahap, kecepatan masuk cairan tetap tidak berubah, dan fluks material rata-rata adalah 50LMH.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa protein target terperangkap seluruhnya. Kaset membran 10kd Teknologi Panduan dapat berjalan dengan stabil dan cocok untuk skenario aplikasi ini.
Sebagian besar protein rekombinan yang diekspresikan oleh ragi tidak diekspresikan secara tinggi. Kekeruhan cairan yang disaring jelas berkurang dan tingkat perolehan protein lebih tinggi. Karena waktu kromatografi selanjutnya yang terlalu lama akan menimbulkan efek buruk pada protein, untuk mempersingkat waktu pengambilan sampel kromatografi, dapat ditambahkan satu langkah konsentrasi ultrafiltrasi, dan protein target dapat dikonsentrasikan dengan cepat setelah sampel, yang dapat mencapai tujuan menghemat waktu, mengurangi volume pengisi dan dengan demikian mengurangi biaya produksi.
Kaset membran mikrofiltrasi Teknologi Guidling umumnya dapat mengurangi kekeruhan cairan umpan hingga kurang dari 20NTU, sepenuhnya memenuhi kebutuhan ultrafiltrasi dan kromatografi berikutnya. Tingkat pemulihan ultrafiltrasi kaset membran ultrafiltrasi akan bervariasi karena bahan yang berbeda, tingkat pemulihan secara umum dapat mencapai 90-95%.
Teknologi Panduan menyambut Anda untuk meminta alat tes untuk evaluasi terkait.
Tentang Panduan
Guidling Technology adalah perusahaan teknologi tinggi nasional yang berfokus pada biofarmasi, kultur sel, pemurnian dan konsentrasi biomedis, diagnosis, dan cairan industri. Kami telah berhasil mengembangkan perangkat filter sentrifugal, kaset ultrafiltrasi & mikrofiltrasi, filter virus, sistem TFF, filter kedalaman, serat berongga, dll. Yang sepenuhnya memenuhi skenario penerapan biofarmasi, kultur sel, dan sebagainya. Membran dan filter membran kami banyak digunakan dalam konsentrasi, ekstraksi dan pemisahan pra-filtrasi, mikrofiltrasi, ultrafiltrasi, dan nanofiltrasi. Berbagai lini produk kami, mulai dari filtrasi laboratorium kecil sekali pakai hingga sistem filtrasi produksi, pengujian sterilitas, fermentasi, kultur sel, dan banyak lagi, memenuhi kebutuhan pengujian dan produksi. Guidling Technology berharap dapat bekerja sama dengan Anda!
