Kromatografi Membran Penukar Anion Lemah DEAE

Kromatografi Membran Penukar Anion Lemah DEAE – Pengenalan Produk

 

1. Ikhtisar

Kromatografi penukar anion lemah DEAE adalah teknik pemurnian berdasarkan perbedaan sifat muatan dan kepadatan muatan berbagai biomolekul. Karena sebagian besar biomakromolekul mengandung gugus fungsi seperti gugus karboksil atau hidroksil, karakteristik muatan dan besarannya dapat disesuaikan dengan memodifikasi pH larutan buffer. Setelah biomolekul berikatan dengan media penukar anion atau kation yang bermuatan berlawanan, pemisahan dicapai dengan mengubah kekuatan ion atau pH fase gerak. Molekul dengan afinitas pengikatan yang lebih lemah dielusi terlebih dahulu, diikuti oleh molekul dengan afinitas pengikatan yang lebih kuat, sehingga menghasilkan pemisahan yang efektif.

 

2. Keunggulan Produk

2.1 Efisiensi tinggi: Mencapai pengikatan kuat pada laju aliran hingga 40 kali lebih tinggi dibandingkan kromatografi berbasis resin-. Dibandingkan dengan kromatografi lapisan kemasan tradisional, kromatografi membran mempersingkat waktu proses keseluruhan sekitar 30–40 kali lipat.

2.2 Efisiensi pengikatan yang tinggi: Kromatografi membran menunjukkan kapasitas pengikatan yang tinggi dan laju aliran yang tinggi pada penurunan tekanan yang rendah, sehingga biomolekul bermuatan dapat ditangkap dalam sekali lintasan melalui kolom.

2.3 Dapat diskalakan dan fleksibel: Rangkaian lengkap produk kromatografi membran dapat memenuhi beragam kebutuhan pemurnian biomakromolekul, yang mencakup semua tahapan mulai dari pengembangan proses hingga produksi skala besar-. Desain struktur tipe kapsul-mendukung pengoperasian-sekali pakai dan penggunaan kembali setelah dibersihkan.

2.4 Peningkatan produktivitas: Desain yang ringkas meminimalkan jejak fasilitas. Dengan menghilangkan prosedur pengepakan kolom, pembersihan, validasi pembersihan, dan penyimpanan kolom, sistem dapat dioperasikan langsung setelah keseimbangan buffer tanpa pengepakan atau penyimpanan kolom. Biaya tenaga kerja dapat dikurangi hingga 50%.

 

3. Parameter Teknis

3.1 Bahan Struktural

	skala laboratorium	skala kecil	skala percontohan	skala produksi
Volume membran	0,2ml	5ml	140ml	5L
Struktur pendukung membran	Polipropilena (PP)
Perumahan membran	Polipropilena (PP)
Oh cincin	Silikon

3.2 Karakteristik pengoperasian

	skala laboratorium	skala kecil	skala percontohan	Skala produksi
Volume membran	0,2ml	5ml	400ml	5L
Laju aliran yang disarankan	1-6ml/menit	25-150ml/menit	2-12L/menit	25-150L/menit
Suhu pengoperasian maksimum	35 derajat
Tekanan operasi maksimum	3bar (25 derajat)
Tekanan diferensial maksimum	3bar (25 derajat)
Kondisi penyimpanan	20% larutan etanol 20% dalam air

Gambar 1. Perubahan kapasitas pemuatan kromatografi membran setelah beberapa kali penggunaan dipantau dengan BSA.

Selain itu, kami mengevaluasi efisiensi penghilangan protein sel inang dan asam nukleat menggunakan kromatografi membran DEAE. Hasilnya adalah sebagai berikut.

	DNA				Profesi Kesehatan
	Pemulihan IgG	Konten (pg/mg IgG) oleh RT PCR		Faktor Penghapusan	Konten (ng/mg IgG)oleh Elisa		Faktor Penghapusan
Berlari	%	Sebelum Membran DEAE	Setelah Membran DEAE	Catatan	Sebelum Membran DEAE	Setelah Membran DEAE	Catatan
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

Tabel 1. Laju penghilangan DNA dan protein sel inang dari CHO-yang mengekspresikan IgG menggunakan kromatografi membran DEAE.

Serangkaian percobaan menunjukkan bahwa kromatografi membran Q dapat secara efektif menghilangkan kotoran, sekaligus mempertahankan tingkat pemulihan IgG target yang tinggi.

Selain itu, kami membandingkan kromatografi membran Gudiling dengan merek impor, dan data kapasitas pemuatannya adalah sebagai berikut.

Gambar 2. Memuat kinerja berbagai protein pada kromatografi membran kami dan produk pesaing

Evaluasi keseluruhan menunjukkan bahwa kapasitas pemuatan kami sebanding dengan produk impor.

Gambar 3. Kinerja modul kromatografi membran DEAE dalam pengujian protein kolagen

Dengan menggunakan modul kromatografi membran DEAE, hasil validasi menunjukkan bahwa sebagian besar protein kolagen target dapat ditangkap dan dielusi menggunakan NaCl 135 mM.

Melalui pengujian dalam kondisi elusi yang berbeda, kami menemukan bahwa kromatografi membran dan kromatografi gel agarosa menunjukkan perilaku elusi yang serupa, di mana kemurnian protein bervariasi secara signifikan pada konsentrasi garam yang berbeda. Dalam praktik penelitian dan pengembangan dan produksi, penting untuk menentukan secara kuantitatif kondisi elusi keseimbangan optimal untuk mendapatkan protein target dengan kemurnian tinggi.

 

4. Kasus aplikasi klasik

Penghapusan DNA, virus, protein sel inang, dan endotoksin

Penangkapan plasmid, virus, asam nukleat, dan protein, serta pemurnian oligonukleotida

 

5. Alur kerja pengoperasian

5.1: Persiapan dan perakitan peralatan

5.1.1 Modul kromatografi membran harus dipasang pada sistem kromatografi AKTA dengan cara yang mirip dengan kolom resin kemasan, memastikan bahwa arah aliran sejajar dengan panah dan arah masuk. Hubungkan menggunakan konektor Luer atau alat penjepit.

5.1.2 Atur laju aliran masuk ke 5–10 MV/menit dan gunakan buffer keseimbangan untuk membersihkan udara. Lanjutkan pembilasan sampai tidak ada gelembung yang terlihat pada saluran keluar, kemudian sambungkan saluran keluar permeat ke sistem kromatografi

5.2:Perawatan sebelum{0}}penggunaan

5.2.1: Atur laju aliran masuk ke 5–10 MV/menit dan lakukan pra-perlakuan dengan NaOH 0,5 M selama lebih dari 5 MV untuk memastikan membran mencapai keseimbangan.

5.2.2: Pada laju aliran yang sama, pra-perlakukan lebih lanjut dengan buffer keseimbangan (1× PBS) selama lebih dari 5 MV untuk memastikan bahwa membran mencapai keseimbangan.

5.3 Proses kromatografi

5.3.1

Atur laju aliran masuk ke 5–10 MV/mnt dan lakukan pra-perlakukan dengan buffer keseimbangan lebih dari 5 MV hingga membran mencapai keseimbangan.

5.3.2

Setelah sampel dipra-disaring melalui filter 0,22 μm, masukkan sampel hingga pemuatan selesai atau kapasitas pemuatan kromatografi tercapai.

5.3.3

Cuci dengan buffer keseimbangan lebih dari 10 MV hingga serapan UV turun ke tingkat dasar.

5.3.4

Gunakan elusi gradien atau elusi linier sesuai dengan desain proses, dan kumpulkan sampel dalam pecahan sesuai kebutuhan.

5.4,CIP Pasca-perlakuan penggunaan – CIP perangkat kromatografi membran

5.4.1

Atur laju aliran masuk ke 5–10 MV/mnt dan lakukan pembersihan-di{-tempat (CIP) dengan NaOH 0,5 M selama lebih dari 10 MV hingga serapan UV turun di bawah garis dasar.

5.4.2

Setelah mencuci secara bersirkulasi selama 30 menit, alihkan ke pencucian dengan air hingga pH antara 7–8, lalu lanjutkan pembersihan dengan etanol 20% hingga konduktivitasnya hampir konstan.

5.5, Penyimpanan kromatografi membran:

Setelah penggunaan dan penyelesaian CIP, modul membran dapat dilepas dan disimpan dengan cara direndam dalam etanol 20%, atau disimpan online pada suhu kamar dalam larutan etanol 20%. Larutan etanol 20% harus diperiksa dan diganti secara berkala.

 

6. Informasi pemesanan

DEAE-tipe filter kapsul kromatografi membran penukar anion lemah

	Skala-laboratorium	skala kecil	Skala percontohan	Skala produksi
Model produk	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
Volume membran	0,2ml	5ml	400ml	5L

Tag populer: kromatografi membran penukar anion lemah deae, Cina, pemasok, produsen, pabrik, grosir, massal, dalam stok, sampel gratis