Kromatografi Membran Penukar Kation Kuat SP

Pengenalan Ion Lemah CM-Produk Kromatografi Membran Pertukaran

 

1. Ikhtisar

Kromatografi pertukaran kation lemah CM-adalah teknologi pemurnian yang menggunakan gugus karboksimetil yang diikat ke membran untuk membentuk modul fungsional. Pemisahan dicapai berdasarkan perbedaan sifat muatan dan kepadatan muatan berbagai biomolekul. Karena sebagian besar makromolekul biologis mengandung gugus karboksil atau hidroksil, karakteristik muatan dan besarannya dapat disesuaikan dengan mengubah nilai pH larutan buffer. Setelah biomolekul berikatan dengan modul membran yang membawa muatan berlawanan, elusi dilakukan dengan mengubah kekuatan ion atau pH fase gerak. Molekul dengan afinitas pengikatan yang lebih lemah dielusi terlebih dahulu, sedangkan molekul dengan afinitas pengikatan yang lebih kuat dielusi kemudian, sehingga mencapai pemisahan yang efektif.

 

2. Keunggulan Produk

2.1 Cepat dan efisien: Kapasitas pengikatan tinggi dapat dicapai pada laju aliran hingga 40 kali lebih cepat dibandingkan kromatografi berbasis resin konvensional-. Dibandingkan dengan kromatografi lapisan kemasan tradisional, kromatografi membran dapat mempersingkat waktu proses sebanyak 30–40 kali lipat. Laju aliran operasi tipikal adalah 10 MV/menit.

2.2 Efisiensi pengikatan yang tinggi: Kromatografi membran menunjukkan kapasitas pemuatan yang tinggi dan laju aliran yang tinggi dalam kondisi penurunan tekanan yang rendah, memungkinkan biomolekul bermuatan ditangkap dalam sekali lintasan melalui modul.

2.3 Dapat diskalakan dan fleksibel: Rangkaian lengkap produk kromatografi membran dapat memenuhi beragam kebutuhan pemrosesan biomakromolekul, yang mencakup tahapan mulai dari pengembangan proses hingga-manufaktur skala besar. Desain kapsul memungkinkan aplikasi-sekali pakai atau dapat dibersihkan dan digunakan kembali sesuai kebutuhan.

2.4 Peningkatan produktivitas: Desain yang ringkas meminimalkan jejak fasilitas. Dengan menghilangkan langkah-langkah pengepakan kolom, pembersihan, validasi pembersihan, dan penyimpanan kolom, pemrosesan dapat dimulai setelah keseimbangan dengan volume buffer yang relatif kecil. Tanpa memerlukan pengemasan, pembersihan, atau penyimpanan kolom, biaya tenaga kerja dapat dikurangi hingga lebih dari 50%.

 

3 Parameter Teknis

3.1 Bahan struktural

	Skala laboratorium	skala kecil	Skala percontohan	Skala produksi
Volume membran	0,2ml	5ml	140ml	5L
Struktur pendukung membran	Polipropilena
Perumahan membran	Polipropilena
Oh cincin	Karet silikon

3.2 Karakteristik Operasi

	Skala laboratorium	skala- kecil	Skala- percontohan	Skala produksi
Volume membran	0,2ml	5ml	400ml	5L
Laju aliran yang disarankan	1-6ml/menit	25-150ml/menit	2-12L/menit	25-150L/menit
Suhu pengoperasian maksimum	35 derajat
Tekanan operasi maksimum	3bar (25 derajat)
Perbedaan tekanan maksimum	3bar (25 derajat)
Kondisi penyimpanan	Larutan berair etanol 20%.

Dibandingkan dengan media konvensional, masa pakai kromatografi membran CM sebanding dengan masa pakai gel agarosa CM 6FF.

Gambar 1. Perubahan kapasitas pemuatan kromatografi membran CM setelah beberapa kali penggunaan dalam pengujian lisozim.

Selain itu, kami mengevaluasi efisiensi penghilangan protein sel inang dan asam nukleat dengan kromatografi membran. Hasilnya ditunjukkan di bawah ini.

Tabel 1. Laju penyingkiran DNA dan protein sel inang pada bahan IgG yang diekspresikan CHO-menggunakan kromatografi membran CM

Serangkaian percobaan menunjukkan bahwa kromatografi membran CM dapat secara efektif menghilangkan kontaminan sambil mempertahankan tingkat pemulihan IgG target yang tinggi.

	DNA				Profesi Kesehatan
	Pemulihan IgG	Konten (pg/mg IgG) oleh RT PCR		Faktor Penghapusan	Konten (ng/mg IgG)oleh Elisa		Faktor Penghapusan
Berlari	%	Sebelum Membran Q	Setelah Membran Q	Catatan	Sebelum Membran Q	Setelah Membran Q	Catatan
1	96.7	423	6.9	1.79	7	6.1	0.06
2	97.4	438	5.8	1.88	7	4.8	0.16
3	94.7	513	9.6	1.73	6	3.6	0.22
4	95	32	4.6	0.84	6	4.7	0.11
5	96.3	45	4.6	0.99	8	5.1	0.20
6	96.5	158	8.2	1.28	8	4.6	0.24
7	96.4	267	6.5	1.61	9	6.8	0.12
8	96.8	298	5	1.78	9	7.4	0.09
9	97.1	746	5.6	2.12	4	3.5	0.06
10	96.6	39	5	0.89	4	3.9	0.01

Menggunakan kromatografi membran Gudiling CM dibandingkan dengan merek lain, data kapasitas pemuatan ditunjukkan di bawah ini.

Kapasitas pemuatan (mg/mL)	Jingbiao 1	Membimbing
Lisozim	18	23
Tripsin	17	20

Tabel 2. Performa pemuatan berbagai protein dalam produk kami dibandingkan dengan produk pesaing

Evaluasi keseluruhan menunjukkan bahwa kapasitas pemuatan kami sebanding dengan produk impor.

Gambar 2. Uji kapasitas pembebanan modul kromatografi membran CM menggunakan lisozim sebagai protein standar.

Kapasitas pemuatan dinamis juga dibandingkan dengan produk impor. Verifikasi menunjukkan bahwa lisozim dapat dielusi menggunakan 160 mM NaCl, yang memungkinkan penangkapan sebagian besar protein target secara efisien.

Melalui optimalisasi kondisi elusi yang berbeda, kami menemukan bahwa kromatografi membran menunjukkan perilaku elusi yang mirip dengan kromatografi gel agarosa, di mana kemurnian protein bervariasi secara signifikan pada konsentrasi garam yang berbeda. Dalam praktik penelitian dan pengembangan dan produksi, kondisi elusi kesetimbangan perlu ditentukan secara kuantitatif untuk memperoleh protein target dengan kemurnian{1}}tinggi.

 

4. Kasus aplikasi yang umum

• Penghapusan DNA, virus, dan protein sel inang
• Penangkapan plasmid, virus, dan protein, serta pemurnian oligonukleotida
• Dekolorisasi kaldu fermentasi ragi dan-penangkapan protein berkapasitas tinggi

 

5. Prosedur Operasi / Alur Kerja

5.1: Persiapan dan perakitan peralatan:

5.1.1: Memasang modul kromatografi membran pada sistem kromatografi AKTA Metode pemasangannya mirip dengan media kromatografi lapisan kemasan; pastikan arah aliran mengikuti tanda panah pada modul. Modul dapat dihubungkan menggunakan konektor Luer atau konektor penjepit.

5.1.2 Atur laju aliran masuk pada 5–10 MV/menit dan gunakan buffer keseimbangan untuk mengeluarkan udara dari modul. Lanjutkan pembilasan sampai tidak ada gelembung yang terlihat pada saluran keluar, kemudian sambungkan saluran keluar permeat ke sistem kromatografi.

5.2.:Persiapan-pra-penggunaan

5.2.1: Atur laju aliran masuk pada 5–10 MV/menit dan lakukan perlakuan awal menggunakan NaOH 0,5 M selama lebih dari 5 MV untuk memastikan membran mencapai keseimbangan.

5.2.2: Pada kondisi laju aliran yang sama, lakukan pra-perlakuan dengan 1 M NaCl selama lebih dari 5 MV untuk memastikan membran mencapai keseimbangan.

5.3. Proses kromatografi

5.3.1 Atur laju aliran masuk ke 5–10 MV/menit dan lakukan pra-perlakuan dengan buffer keseimbangan lebih dari 5 MV hingga membran mencapai keseimbangan.

5.3.2 Setelah pra-filtrasi 0,22 μm, masukkan sampel ke dalam kolom dan lanjutkan hingga seluruh sampel telah diaplikasikan atau kapasitas pemuatan kromatografi tercapai.

5.3.3 Cuci dengan buffer keseimbangan lebih dari 10 MV hingga nilai UV turun ke garis dasar.

5.3.4 Menurut desain proses, terapkan elusi gradien atau sistem elusi linier, dan kumpulkan pecahan dalam segmen sesuai kebutuhan.

5.4 Perawatan Pasca-penggunaan CIP – CIP (Bersihkan-di-Tempat) untuk sistem kromatografi membran.

5.4.1 Atur laju aliran masuk ke 5–10 MV/menit dan obati dengan 1 M NaOH selama lebih dari 10 MV hingga nilai UV turun di bawah garis dasar.

5.4.2 Setelah sirkulasi pencucian selama 30 menit, bilas dengan air hingga pH antara 7 dan 8, kemudian ganti dengan etanol 20% dan lanjutkan pembersihan hingga konduktivitas hampir tidak berubah.

5.5 Penyimpanan kromatografi membran

Setelah penggunaan dan penyelesaian CIP, modul membran dapat dilepas dan disimpan dengan cara direndam dalam etanol 20%, atau disimpan secara online pada suhu kamar dalam larutan yang mengandung etanol 20%. Larutan etanol 20% harus diperiksa dan diganti secara teratur.

 

6, informasi pesanan

Filter kapsul kromatografi membran penukar kation lemah tipe CM-

	Skala laboratorium	Skala kecil	Skala percontohan	Skala produksi
Model	IEXCM0002ES	IEXCM0050ES	IEXCM0400ES	IEXCM5000ES
Daerah membran	0,2ml	5ml	400ml	5L

Tag populer: sp kromatografi membran penukar kation yang kuat, Cina, pemasok, produsen, pabrik, grosir, massal, dalam stok, sampel gratis